Kultivácia v kuracích embryách. Infekcia kuracích embryí Mikrobiológia kuracích embryí

Dobré popoludnie, milí čitatelia! Dnes poskytneme popis, ukážeme fotografie a videá o vývoji kurčaťa vo vajci každý deň počas inkubácie doma a na hydinových farmách. s istotou praktizovaný v továrenskom meradle aj v súkromných farmách.

Ale napriek jeho širokej distribúcii len málo ľudí premýšľa o komplexnom mechanizme, ktorý je vlastný genetickej úrovni, ktorý zabezpečuje rast a vývoj kurčaťa.

Stále existuje názor, že mláďa vyrastá zo žĺtka. V tomto článku sa dozviete všetky tajomstvá skryté pod nimi, ako aj to, aký „strašný“ význam sa skrýva pod slovami allantois v kuracom a amnion v kuracom a akú funkciu plnia.

Fotografia vývoja kurčaťa vo vajci počas dňa

Blastodisk

Vývoj kurčiat začína blastodiskom. Blasodisc je malá zrazenina cytoplazmy umiestnená na povrchu žĺtka. V mieste blastodiska je hustota žĺtka oveľa nižšia, čo prispieva k neustálemu plávaniu žĺtka s blastodiskom nahor.

Táto funkcia poskytuje lepšie zahrievanie počas inkubácie. Oplodnený blastodisk sa v tele kurčaťa začne deliť a v čase demolácie je úplne obklopený blastodermou. Bladisc vyzerá ako malá biela škvrna s veľkosťou asi 2 mm.

Svetlé halo, prstenec obklopujúci embryonálny disk, je blastoderm.

Keď sa vajíčko dostane do priaznivého prostredia, ktoré sa po znesení zastaví, delenie buniek pokračuje.

Mali by ste vedieť: Na rozdiel od všeobecného presvedčenia, že ovoskopiu je možné vykonávať až od 6. dňa inkubácie, je vývoj blastodermy jasne viditeľný po 18-24 hodinách od začiatku inkubácie. V tomto bode je zreteľne viditeľné stmavnutie s priemerom 5–6 mm, ktoré sa pri prevrátení vajíčka ľahko pohybuje.

Na 2. – 3. deň inkubácie sa začína vývoj provizórnych črievok:

1. Kurací amnion
2. Allantois v kura

Všetky z nich sú v skutočnosti dočasné orgány určené na vykonávanie funkcií zabezpečenia životne dôležitej činnosti embrya až do okamihu jeho konečnej formácie.

Kurací amnion

Ide o škrupinu, ktorá vďaka výplni tekutinou chráni embryo pred fyzickým nárazom a vyschnutím. Amnion kuriatka reguluje množstvo tekutiny podľa veku embrya.

Epiteliálny povrch amniotického vaku je schopný naplniť dutinu s embryom vodou a tiež zabezpečuje odtok tekutiny pri jeho raste.

Allantois v kura

Jeden z dočasných orgánov, ktorý vykonáva mnoho funkcií:

• prívod kyslíka do embrya;
• izoluje odpad z embrya;
• podieľa sa na transporte tekutín a živín;
• vykonáva dodávku minerálov a vápnika zo škrupiny do embrya.

Allantois u kurčiat v procese rastu vytvára rozvetvenú cievnu sieť, ktorá lemuje celý vnútorný povrch vajíčka a spája sa s kurčiatkom cez pupočnú šnúru.

Dýchanie kura vo vajci

Výmena kyslíka vo vajci má v závislosti od štádia vývoja kuriatka odlišný mechanizmus. V počiatočnom štádiu vývoja prúdi kyslík zo žĺtka priamo do buniek blastodermu.

S objavením sa obehového systému vstupuje kyslík do krvného obehu, stále zo žĺtka. Ale žĺtok nemôže plne zabezpečiť dýchanie rýchlo rastúceho organizmu.

Počnúc 6. dňom sa funkcia poskytovania kyslíka postupne presúva na alantois. Jeho rast začína smerom k vzduchovej komore vajíčka a po jeho dosiahnutí pokrýva stále väčšiu vnútornú plochu škrupiny. Čím viac kurča rastie, tým viac alantois pokryje.

Pri ovoskopii vyzerá ako ružovkastá sieť, ktorá pokrýva celé vajíčko a uzatvára sa na jeho ostrej strane.

Kurča v kŕmení vajíčkami

V prvých dňoch vývoja embryo využíva živiny bielkovín a žĺtka. Keďže žĺtok obsahuje celý komplex minerálov, tukov a sacharidov, je schopný zabezpečiť všetky počiatočné potreby rastúceho organizmu.

Po uzavretí alantoisu (11 dní vývoja) nastáva prerozdelenie funkcií. Embryo sa zväčší a zaujme polohu pozdĺž dlhej osi vajíčka s hlavou smerom k tupému koncu. V tomto bode sa proteín koncentruje na ostrom konci vajíčka.

Hmotnosť kuriatka v spojení s tlakom alantoisu zaisťuje, že proteín je vytlačený a preniknutý cez amnion do úst embrya. Tento nepretržitý proces zabezpečuje rýchly rast a vývoj kuriatka vo vajci každý deň počas inkubácie.

Minerály, ktoré kuriatko využíva na ďalší vývoj, mu od 13. dňa dodáva alantois zo škrupiny.

Mali by ste vedieť: Normálnu výživu kurčaťa môže poskytnúť iba včas uzavretý alantois v kura. Ak, keď sa zavrie, na ostrom konci vajíčka nebude bielkovina pokrytá cievami, kura nebude mať dostatok živín na ďalší rast.

Poloha vajec a vývoj kurčiat

V poslednej dobe sa stále viac praktizuje inkubácia kuracích vajec vo vzpriamenej polohe. Táto metóda však neovplyvňuje vývoj kurčaťa najlepším spôsobom.

Vo vzpriamenej polohe je maximálny sklon v zákrutách 45°. Tento sklon nestačí na normálny rast alantoisu a jeho včasné uzavretie. To platí najmä pre veľké vajcia.

Pri inkubácii v horizontálnej polohe je zabezpečená rotácia o 180°, čo má pozitívny vplyv na rast alantois a v dôsledku toho aj na kŕmenie kuriatka.

Vajcia vyliahnuté vo vzpriamenej polohe majú spravidla o 10 % nižšiu hmotnosť ako tie, ktoré sa vyliahnu vo vodorovnej polohe.

Význam otáčania vajec pre vývoj kurčiat

Otáčanie vajíčok počas inkubácie je potrebné vo všetkých štádiách vývoja, okrem prvého dňa a posledných dvoch. Prvý deň je potrebné intenzívne zahriatie blastodiska a posledný deň už drobec zaujal pozíciu na prerazenie škrupiny.

V počiatočných štádiách vývoja otáčanie vajíčok eliminuje riziko prilepenia blastodermu alebo amniónu na vnútornú stranu škrupiny.

Pivoting tiež prispieva k:

• zníženie amniónu;
• rovnomerné zahrievanie vajec;
• prijatie správnej polohy embryom;
• zlepšenie výmeny plynu;
• včasné uzavretie alantoisu;
• zlepšenie výživy embrya.

Teraz, po prečítaní článku, je možné posúdiť zložitosť procesov vyskytujúcich sa u malého kohútika alebo kurčaťa počas jeho vývoja z niekoľkých buniek na malého vtáka. Tento proces nie je o nič menej komplikovaný ako vývoj ľudského dieťaťa alebo napríklad mačiatka v maternici, kde sú zaručené stále podmienky.

Vývoj kuriatka vo vajci každý deň závisí výlučne od vonkajších podmienok, ktorých zabezpečením je inkubácia.

Prajeme vám všetkým úspešné vyliahnutie žltých, šedých a iných mačičiek!

Prihláste sa na odber aktualizácií stránok, aby ste sa ako prví dozvedeli novinky o kurčatách, ktoré pomôžu vyriešiť všetky problémy.

Tu je fotografia od našej stálej čitateľky Julie Areptevovej, kura sa vyliahlo pod!

Do komentárov môžete pridať svoje fotky nosníc, kohútov a kurčiat! Alebo inú hydinu. Zaujímalo by nás, aký máte kurník?
Páčil sa vám článok? Zdieľajte so svojimi priateľmi na sociálnych sieťach:

Pridajte sa k nám na VKontakte, prečítajte si o kurčatách!

(CE) - kuracie embryo v rôznych štádiách embryonálneho vývoja. V mikrobiol. prax sa používa na izoláciu, kultiváciu a identifikáciu vírusov, rickettsie a niekedy aj baktérií. Na laboratórne účely vyberajte čerstvé, oplodnené, s dobre priesvitnou EC škrupinou bez prasklín. Inkubácia sa vykonáva v hniezdach trojnožky tupým koncom vajíčka nahor v dobre vetraných inkubátoroch alebo termostatoch pri teplote 37 - 37,5 ° C, relatívnej vlhkosti 63 - 65%. Na infekciu vyberte 4-13-dňové embryá s výraznými krvnými cievami, žĺtkovým vakom a pohyblivým tieňom. Pred infekciou sa vaječné škrupiny ošetria alkoholom, spália a v oblasti vpichu (zvyčajne nad vzduchovou komorou) sa namažú 2% jódovou tinktúrou. Materiál alebo výskum to-ru sa zavádza s otvorením alebo bez otvorenia škrupiny do žĺtkového vaku (rickettsia), do alantoidnej alebo amniotickej dutiny (väčšina vírusov), aplikuje sa na chorion-alantoidnú membránu. Menej často sa to-py vstrekuje do tela embrya alebo intravenózne. Infikované CE sa umiestnia do termostatu za podmienok a na obdobie, ktoré závisia od typu mikróbov a cieľov výskumu. Niektoré údaje o výsledkoch infekcie možno získať externým vyšetrením CE pod mikroskopom (cievna injekcia, strata pohyblivosti atď.). Vo väčšine prípadov sa však CE otvára. Za týmto účelom sa po ošetrení alkoholom a jódovou tinktúrou odreže škrupina nad okrajom vzduchového vaku Pasteurovou pipetou alebo injekčnou striekačkou, najskôr sa odsaje alantoická a potom plodová voda, aby sa zabránilo poškodeniu ciev a žĺtkový vak. Embryo a chorionallantoická membrána sa odstránia z obalu, umiestnia sa do sterilných misiek, premyjú sa sterilnou destilovanou vodou. vody a skúmať. Ďalší priebeh štúdia embrya a jeho tekutín závisí od typu mikróbu alebo vírusu a cieľov experimentu.

Hodnota sledovania Kuracie embryo v iných slovníkoch

Kura- pozri kurčatá.
Dahlov vysvetľujúci slovník

Kuracie Adj.- 1. Zodpovedá hodnotou. s podstatným menom: kura spojené s tým. 2. Zvláštne pre kura, charakteristické pre ňu. 3. Vlastní kura. 4. Vyrobené z mäsa, s kuracím mäsom. 5..........
Efremovej výkladový slovník

Kura- kura, kura. 1. Aplikácia ku kuraťu. Kuracie perie. || Vyrobené z kuracieho mäsa. Kuracie rezne. bujón. 2. vo význame. podstatné meno kura, kura, vyd. kura, kura, porov. Oddelenie vtákov, ..........
Ušakovov výkladový slovník

Kura- th, th.
1. ku Kura a kura. K-té pierko. K-té kosti. K-té klackanie. K-tá kotleta. K. vývar. // Ako napríklad kura, kura. K-tý hrudník (stlačený zo strán, silne vyčnievajúci dopredu ........
Vysvetľujúci slovník Kuznecov

Kurací boh- v ruskej dedine až po súčasnosť. XX storočia rituálny predmet, zvyčajne kameň s priechodným otvorom, pripomínajúci vtáčiu hlavu, ktorý bol zavesený v kurníku ako talizman ........
Historický slovník

KURA- CHICKEN, th, th. 1. pozri kura. 2. kura, -kh- Oddelenie vtákov, medzi ktoré patria domáce kurčatá, morky, bažanty, perličky a niektoré ďalšie.
Ozhegovov výkladový slovník

EMBRYO- EMBRION, -a, m, (osobitný). Embryo (v 1 hodnote) v počiatočných štádiách vývoja. || adj. embryonálny, th, th a embryonálny, th, th (zastarané). Embryonálny vývoj.
Ozhegovov výkladový slovník

EMBRYO- EMBRYO, embryo, m.(grécky embryon) (kniha). 1. Embryo (rastlinné, živočíšne; biol.). 2. prevod. To isté (o myšlienke, nápade atď.). Zárodok umeleckého dizajnu.
Ušakovov výkladový slovník

Embryo- m) 1. ľudský alebo zvierací organizmus v počiatočnom štádiu vývoja; embryo. 2. prevod. hovorový Rudiment niektorých myšlienky, nápady atď.
Efremovej výkladový slovník

EMBRYO- EMBRYO (grécky embryon - embryo), živočíšny organizmus v ranom období vývinu, rovnaký ako embryo. Vo vzťahu k rastlinám sa používa iba výraz „embryo“ .. (

Embryá sa používajú vo veku 8 až 14 dní v závislosti od typu vírusu, spôsobu infekcie. Reprodukcia u kuracích embryí sa vyskytuje v rôznych častiach embrya.Spôsoby infekcie: na chorionallantoickej membráne, v alotoickej a amniovej, žĺtkovom vaku, tele embrya.

29. Tkanivové kultúry.

V závislosti od techniky varenia existujú 3 typy buniek:

Monovrstvy sú schopné množiť sa na povrchu chemicky neutrálneho skla vo forme monovrstvy;

Suspenzia, násobenie v celom objeme živného média;

Orgán – celé kusy orgánov a tkanív, zachovávajúce pôvodnú štruktúru.

Príprava primárnej bunkovej kultúry pozostáva z niekoľkých fáz: mletie tkaniva, separácia buniek, premytie výslednej suspenzie z trypsínu.

Indikácia:

- cytopatické pôsobenie - morfologické zmeny v bunkách viditeľné pod mikroskopom, až po odmietnutie zo skla.

Vírusové inklúzie sú akumuláciou vírusových častíc alebo separáciou vírusových zložiek v cytoplazme alebo jadre buniek.

Plaky sú lokalizované oblasti degeneratívnych buniek. Sú viditeľné ako svetlé škvrny na pozadí zafarbených buniek.

Farebný test

Hemadsorpcia je schopnosť bunkových kultúr adsorbovať erytrocyty na svojom povrchu.

Rušenie.

30. Klasifikácia, chemické zloženie bakteriofágov.

Bakteriofág - bakteriálne vírusy, ktoré majú schopnosť prenikať do bakteriálnych buniek, spôsobujú ich rozpustenie. Majú tvar pulca, niektoré sú kubické vláknité. Pozostávajú z ikosaedrickej hlavy a chvostového výbežku. Vo vnútri kaudálneho výbežku je valcovitý driek, zvonku je kryt, výbežok končí šesťhrannou bazálnou doskou s krátkymi tŕňmi. Fágy sú zložené z nukleovej kyseliny a proteínu. Vo fágoch v tvare spermií je dvojvláknová DNA pevne zabalená v špirálovej forme vo vnútri hlavy. Proteíny sú súčasťou škrupiny. Okrem štrukturálnych proteínov boli nájdené aj vnútorné proteíny spojené s nukleovou kyselinou a enzýmové proteíny zapojené do interakcie fágu s bunkou.

31. Proces interakcie virulentných fágov a bakteriálnej bunky citlivej na ne

Počet virulentných fágov sa môže zvyšovať iba počas lytického cyklu. Proces interakcie virulentného bakteriofága s bunkou pozostáva z niekoľkých fáz: adsorpcia bakteriofága na bunku, penetrácia do bunky, biosyntéza zložiek fágu a ich zostavenie a uvoľnenie bakteriofágov z bunky.

Spočiatku sa bakteriofágy naviažu na fágovo špecifické receptory na povrchu bakteriálnej bunky. Fágový chvost za pomoci enzýmov na svojom konci (hlavne lyzozýmu) lokálne rozpúšťa bunkovú membránu, sťahuje sa a DNA obsiahnutá v hlavičke je vstreknutá do bunky, zatiaľ čo membrána bakteriofágového proteínu zostáva vonku. Injikovaná DNA spôsobuje úplnú reštrukturalizáciu bunkového metabolizmu: zastaví sa syntéza bakteriálnej DNA, RNA a proteínov. Bakteriofágová DNA sa začne prepisovať pomocou vlastného enzýmu transkriptázy, ktorý sa aktivuje po vstupe do bakteriálnej bunky. Najprv sa syntetizujú skoré a potom neskoré mRNA, ktoré vstupujú do ribozómov hostiteľskej bunky, kde sa syntetizujú skoré (DNA polymerázy, nukleázy) a neskoré (proteíny kapsidového a chvostového procesu, lyzozým, ATPáza a enzýmy transkriptázy) proteíny bakteriofága. Replikácia bakteriofágovej DNA prebieha semikonzervatívnym mechanizmom a uskutočňuje sa za účasti vlastných DNA polymeráz. Po syntéze neskorých proteínov a dokončení replikácie DNA sa začína konečný proces – dozrievanie fágových častíc alebo spojenie fágovej DNA s membránovým proteínom a vznik zrelých infekčných fágových častíc.

Infekcia na chorionallantoickej membráne. Táto metóda je jednou z najpoužívanejších. Jeho hlavnou výhodou je, že množstvo vírusov pri množení na choriolantoickej membráne spôsobuje jej charakteristické zmeny, tvoriace lézie vo forme belavých plakových škvŕn rôznej morfológie.

Na infekciu sa používajú embryá vo veku 10-12 dní. Zvyčajne sa chorionallantoická membrána prenikne vytvorením otvoru v škrupine nad vzduchovým vakom alebo na strane vajíčka.

Hlavné štádiá infekcie na chorionallantoickej membráne zo strany vzdušného priestoru:

1. Vajíčko sa umiestni na stojan vo zvislej polohe.
tak, aby bol airbag hore) "; vykonajte
dôkladná sterilizácia škrupiny na tupom konci vajíčka.

2. Nad stredom airbagu je škrupina prepichnutá
pomocou pitevnej ihly.

3. Do výsledného otvoru sa vloží vetva nožníc a
vystrihnite okienko v škrupine s priemerom asi 1,5 cm. (Kde
nedovoľte, aby sa kúsky škrupiny dostali dovnútra vajíčka).

4. Cez vytvorený otvor je viditeľný vnútorný list
škrupina škrupina, opatrne sa trhá s okom
pinzetou alebo ihlou a odlúpnite na malej ploche (0,5-1
cm 2), čím sa odkryje chorionallantoická membrána.

5. Vyvolajte infekciu chorionallantoickej membrány
aplikáciou 0,1-0,2 ml očkovaného materiálu
(napr. vírus vakcínie) Pasteurovou pipetou
alebo injekčná striekačka.

6. Okienko v plášti je uzavreté špeciálnou gumičkou
fólia, sterilné krycie sklíčko alebo sklo
čiapka. Na pripevnenie pohára a uzáveru k škrupine
použite roztavený parafín.

Infikované embryá sa umiestnia do termostatu vo vzpriamenej polohe a inkubujú sa 2-3 dni, po ktorých sa vykoná pitva podľa nasledujúcich pravidiel:

1. Vajíčko je umiestnené na stojane tak, aby vzduch
priestor bol na poschodí, prebieha sterilizácia miesta
nadchádzajúcu pitvu vhodným spracovaním
alkohol a jód.

2. Odstránením fólie, krycieho sklíčka alebo uzáveru
sterilnými nožnicami odrežte škrupinu pozdĺž hranice vzduchu
priestor.

3. Pomocou pinzety odstráňte škrupinu.
Nahá chorionallantoická membrána (na ktorej môže
viditeľné zmeny) sú orezané pozdĺž okraja škrupiny. Naprieč
výsledný otvor sa naleje celý obsah vajíčka do pohára
alebo zásobník.

4. Kyselina chorionalantoová zostávajúca vo vnútri škrupiny
škrupina sa opatrne vyberie pinzetou a vloží sa
sterilný fyziologický pohár. Tu ju
narovnajte a študujte zmeny umiestnením pohára na tmu
pozadie.

Na získanie materiálu obsahujúceho vírus z choriolantoickej membrány sa musí rozdrviť nožnicami a potom rozdrviť v trecej miske s kremenným sklom a pridať soľný roztok. Výsledná suspenzia sa odstreďuje pri 2000 otáčkach za minútu počas 10-15 minút a použije sa supernatant! ako očkovaný materiál (vyžaduje sa povinná kontrola neprítomnosti bakteriálnej kontaminácie).

Infekcia do alantoickej dutiny. Táto metóda

vyznačuje sa jednoduchosťou a je cenný tým, že prispieva k významnej akumulácii vírusu. Na infekciu sa zvyčajne odoberajú embryá vo veku 10-1 dní. Hlavné štádiá infekcie v alantoickej dutine:

}. Vajíčko sa položí na stojan tupým koncom nahor a škrupina sa sterilizuje nad vzdušným priestorom.

2. V strede tupého konca je škrupina prepichnutá
pomocou pitevnej ihly.

3. Ihla injekčnej striekačky obsahujúca riedenie sa vloží do otvoru.
vírus (ako je vírus chrípky). Iglu je povýšené na
vertikálne 2-3 mm pod úrovňou vzduchu
vrecka a potom vstreknite OD-0,2 ml materiálu.

4. Otvor v plášti je utesnený
roztavený sterilný parafín.

Infikované embryá sa uchovávajú v termostate, zvyčajne 2 dni. Pred otvorením sa vajcia umiestnia cez noc do chladničky pri teplote 4 °. Pitva sa vykonáva v tomto poradí:

1.Vajce sa položí na stojan tak, že vzduchový vak je hore, škrupina nad ním je sterilizovaná;

2.Pomocou nožníc sa škrupina nareže o niečo vyššie
hranice vzdušného priestoru.

3. Opatrne odstráňte škrupinu pomocou pinzety
prečo je chorionallantoická membrána prepichnutá Pasteurovou
napipetujte na miesto, kde nie sú cievy, a vysajte alantoikum
kvapalina (je možné zhromaždiť 5-6 ml).

4. Alantoidná tekutina sa prenesie do sterilnej
skúmavky a niektoré sa naočkujú do bujónu na kontrolu
bakteriologická sterilita.

Metóda infekcie v alantoidnej dutine sa často používa na kultiváciu vírusu chrípky, ako aj vakcíny proti mumpsu a kiahňam.

Infekcia v amniovej dutine

Táto metóda je náročnejšia na vykonanie a používa sa o niečo menej často ako predchádzajúce. Jeho zvláštnosťou je, že pri infekcii niektorými pneumotropnými vírusmi (napríklad chrípka, vírusy mumpsu) sa tieto množia nielen v bunkách amniovej membrány, ale aj v dýchacích cestách a pľúcnom tkanive embrya, kde infikovaná tekutina preniká. Na infekciu sa používajú embryá vo veku 7-12 dní. Infekcia do amniotickej dutiny sa uskutočňuje otvorenou metódou, keď sa v škrupine vytvorí pomerne veľký otvor na zavedenie materiálu, alebo uzavretou metódou, keď sa infekcia uskutoční prepichnutím škrupiny.

Prvý z nich je traumatickejší, druhý je menej spoľahlivý, pretože pri slepom konaní nie je vždy možné vložiť ihlu do amniovej dutiny.

Technika otvorenej infekcie:

1. Vajíčko sa položí na stojan a sterilizuje
škrupiny v oblasti tupého konca.

2. Nad stredom vzdušného priestoru plášťa
nožnicami vystrihnite okienko s priemerom 2 cm (ako
na infekciu na chorionallantoickej membráne).

3. Opatrne odstráňte vnútorný obal.
škrupina s pinzetou, odhaľujúca podklad
chorionallantoická membrána.

Vyrežte malý otvor v
chorionallantoická membrána v mieste, kde nie sú cievy, a do rezu sa vložia kliešte. Plodový vak sa uchopí pinzetou a amniotický vak sa pretiahne cez povrch choriolantoickej membrány.

5. Držanie amniotickej membrány v tejto polohe,
spôsobiť infekciu v amniovej dutine injekciou injekčnou striekačkou 0,1-
0,2 ml riedenia vírusu.

6. Otvor v škrupine je uzavretý sterilným uzáverom.
alebo krycím sklíčkom, pomocou ktorého ich zafixujete a
utesnenie vajíčka roztaveným parafínom.

Infikované embryá sa inkubujú 2 dni, mŕtve sa vyhodia počas prvého dňa (pozorovania sa uskutočňujú cez okienko v škrupine). Po otvorení sa embryá uchovávajú cez noc v chladničke pri teplote 4 °C.

Technika otvárania embrya pri infekcii do amniotickej dutiny:

1. Po sterilizácii miesta nadchádzajúcej pitvy odrežte
škrupina je mierne nad okrajom vzduchového vaku.

2. Prepichnite chorionallantoickú membránu
Pasteurovou pipetou a odstráňte alantoickú tekutinu.

3. Uchopte plodový obal pinzetou, prepichnite
jeho kryt ihlou injekčnej striekačky alebo Pasteurovou pipetou a
sa odsaje tekutina amnestie (od 0,5 do 1,5 ml). Mať
infikovaného embrya by medzitým mala byť tekutina zakalená
ako normálne embryo je priehľadné.

4. Odobratá tekutina sa prenesie do sterilnej skúmavky, 0,1-
0,3 ml z nej sa naočkuje do bujónu na kontrolu bakteriológie
sterilita.

Izolácia a kultivácia vírusov

Izolácia a identifikácia patogénu je „zlatým štandardom“ v diagnostike vírusových infekcií.

Bunková kultúra

Vírusy sa rozmnožujú iba v živých bunkách a izolácia patogénu v infikovanej bunkovej kultúre je jednou z hlavných metód diagnostiky vírusových infekcií. Keďže väčšina patogénnych vírusov sa vyznačuje tkanivovou a typovou špecifickosťou, je možné pre takmer každý vírus vybrať vhodné bunkové alebo tkanivové kultúry, ako aj vytvoriť štandardné kultivačné podmienky (prítomnosť buniek rovnakého typu). Rozmnožovanie vírusu zabezpečujú citlivé (permisívne) bunky. Preto sa pri izolácii neznámeho patogénu súčasne infikujú 3-4 bunkové kultúry, čo naznačuje, že jedna z nich môže byť permisívna. Bunkové kultúry sa získavajú dispergovaním príslušných orgánov a tkanív, ale častejšie sa používajú embryonálne tkanivá (ľudí a zvierat) alebo transformované nádorové bunky. Keď sú bunkové kultúry umiestnené na vhodnom rovnom povrchu, zvyčajne rastú ako monovrstva.

Primárne trypsinizované kultúry. Bunkové suspenzie sa pripravujú homogenizáciou príslušných tkanív vopred ošetrených trypsínom. Kultúry sú často zmiešané bunky a nemožno ich rekultivovať. Životaschopnosť takýchto kultúr je 2-3 týždne.

Semitransplantované bunkové línie sú reprezentované diploidnými bunkami ľudí a zvierat. Kultúry sú obmedzené na redisperziu a rast (spravidla nie viac ako 20-30 pasáží), pričom si zachovávajú vitalitu a neprechádzajú spontánnou transformáciou.

Transplantovateľné bunkové línie(heteroploidné kultúry) predstavujú bunky podrobené dlhodobej kultivácii a spontánnym transformáciám. Plodiny sú schopné viacnásobného rozptýlenia a presádzania. Práca s nimi je menej prácna v porovnaní s prípravou primárnych plodín; transplantované bunky sú relatívne identické vo svojej morfológii a stabilné vo vlastnostiach.

Orgánové kultúry

Nie všetky typy buniek sú schopné rásť ako monovrstva, v niektorých prípadoch je udržanie diferencovaných buniek možné len v orgánovej kultúre. Zvyčajne ide o tkanivovú suspenziu so špecializovanou funkciou, označovanú aj ako kultiváciu prežívajúceho tkaniva.

Kuracie embryá (obr. 1-20) - takmer ideálne modely na kultiváciu niektorých vírusov (napríklad chrípky a osýpok). Uzavretá dutina embrya zabraňuje prenikaniu mikroorganizmov zvonku, ako aj rozvoju spontánnych vírusových infekcií. Embryá sa používajú na primárnu izoláciu vírusov z patologického materiálu; na ich pasážovanie a uchovanie, ako aj na získanie potrebných množstiev vírusu. Niektoré patogény (napríklad herpes vírusy) spôsobujú charakteristické zmeny (možno ich použiť na rozpoznanie choroby). Infekcia sa uskutočňuje na chorion-alantoidnej membráne, v amniotickej alebo alantoidnej dutine alebo v žĺtkovom vaku.

Infekcia na chorion-alantoidnej membráne. Zvyčajne sa používajú embryá staré 10-12 dní. Vajíčka sa prezerajú v prechádzajúcom svetle, zaznamená sa umiestnenie vzduchového vaku a vyberie sa oblasť bez ciev. Opatrne odstráňte úlomok škrupiny, uvoľnite vonkajší obal a jemným tlakom ho odlúpnite. Potom sa na okraji airbagu vytvorí otvor. Pri nasávaní cez tento otvor sa chorion-alantoidná membrána odlupuje z vonkajšej membrány. Nanesie sa naň testovaný materiál bez baktérií a prvokov (prejde cez bakteriálne filtre a ošetrí baktericídmi).

Infekcia do amniotickej dutiny. Zvyčajne sa používajú embryá staré 7-14 dní, u ktorých sa po oddelení chorion-alantoidnej membrány (pozri vyššie) otvor roztiahne, amniová membrána sa uchopí kliešťami a vyberie sa cez chorio-alantoidnú membránu . Prostredníctvom nej sa testovací materiál zavádza do amniotickej dutiny.

Infekcia do alantoickej dutiny. Embryá staré 10 dní sa infikujú cez otvory vytvorené v škrupine a pod škrupinou (pozri vyššie).

Infekcia v žĺtkovom vaku. Používajú 3 ~ 8-dňové embryá, u ktorých v tomto veku žĺtkový vak zaberá takmer celú dutinu vajíčka. Infekcia sa uskutočňuje cez otvor vytvorený vo vzduchovom vaku

Pozorovanie a zaznamenávanie výsledkov. Ako očkovaný materiál môžete použiť obsah žĺtkového vaku, alantoidnú a plodovú vodu alebo celé embryo, narezané spolu s okolitým

tkaniny na kusy. Na identifikáciu Obr. 1-20 Schematické znázornenie

charakteristické lézie na embryu kurčiat, v ktorých sa vyvíja chorion.

škrupina sa odstráni z alantoickej membrány

a vonkajší plášť. Potom sa membrána odstráni a umiestni sa do sterilnej vody. Povaha lézií sa študuje na tmavom pozadí.

Zvieracie modely

Ak nie je možné izolovať a identifikovať vírus štandardnými metódami in vitro infekčný materiál sa vstrekuje zvieratám, ktoré sú citlivé na patogén, a po rozvinutí typického infekčného procesu sa citlivé bunkové kultúry opätovne infikujú. Najčastejšie sa používajú myši, králiky a opice; na izoláciu niektorých vírusov (napríklad vírusy Coxsackie) infikujú dojčiace myši. Kvôli vysokým nákladom a zložitosti chovu laboratórnych zvierat boli takmer všade nahradené bunkovými kultúrami. Napriek tomu sa zvieracie modely aktívne používajú na štúdium znakov patogenézy a tvorby imunitných odpovedí pri vírusových infekciách.